Diaclone (Medix Biochemica)
ELISpot Kits & ELISpot Sets
단일 세포 수준 사이토카인 분비 분석
단일 세포 수준에서 사이토카인 및 기타 용해성 분자의 생성과 분비를 분석하는 고특이성 면역측정법. 기존 ELISA 대비 최대 400배 높은 감도(10만 개 세포 중 1개 검출)를 제공합니다. Mono ELISpot, Dual ELISpot(효소), Dual Fluorospot(형광) 포맷으로 제공되며, 백신 개발 임상시험에서 T세포 반응 평가의 기준 방법으로 사용됩니다.
견적 요청 / 문의하기핵심 기능
단일 세포 수준 검출
PVDF/MCE 멤브레인 플레이트에 capture 항체를 고정한 뒤 자극된 세포가 분비하는 cytokine을 분비 부위 주변에 즉시 포획합니다. 세포 한 개당 하나의 spot이 형성되므로 10만 개 세포 중 1개 수준의 희귀 사이토카인 분비 세포까지 식별할 수 있습니다.
ELISA 대비 400배 감도
분비 직후 항원이 well 표면에 즉시 캡처되어 희석·확산 없이 농축되므로, 동일 cytokine을 측정하는 sandwich ELISA 대비 약 400배 높은 감도를 제공합니다. PBMC 수십만 개 중 단일 항원 특이 T cell 정량이 가능합니다.
Dual Fluorospot 동시 검출
두 개의 형광 표지로 IFN-γ + IL-4 같은 2종 사이토카인을 동시에 검출하며, single·double·triple producer를 명확히 구분합니다. Polyfunctional T cell 분석과 Th1/Th2 polarization 평가에 최적화되어 있습니다.
백신 임상 reference method
IFN-γ ELISpot은 COVID-19, HIV, malaria, 암 백신 임상시험에서 항원 특이 T cell 반응을 정량하는 표준 방법입니다. PBMC 100만 개당 SFC(spot-forming cell) 수로 보고되어 다기관·다국가 임상에서 데이터 비교가 가능합니다.
약 3시간 분석 시간
세포 자극·배양이 끝나면 세포 세척, 검출 항체 결합, streptavidin-AP 결합, BCIP/NBT 발색까지 약 3시간 내에 spot 발색이 완료됩니다. 형광 reader 또는 일반 ELISpot reader로 곧바로 카운팅할 수 있어 임상 검체 처리에 적합합니다.
Custom 개발·위탁 분석
ISO 9001 인증 환경에서 자체 항체 클론을 활용해 신규 cytokine ELISpot 페어를 개발하거나, pre-coated plate를 OEM 형태로 위탁 제조합니다. 임상시험 endpoint 분석을 Diaclone 측에서 직접 수행하는 contract testing 서비스도 제공합니다.
단일 세포 수준 사이토카인 검출 — ELISpot 작동 원리
ELISpot은 PVDF 또는 MCE 멤브레인이 깔린 96-well 플레이트에 capture 항체를 사전에 고정한 뒤, 자극된 PBMC·splenocyte를 직접 well에 분주합니다. 자극을 받은 세포가 분비하는 cytokine은 확산되기 전에 capture 항체에 의해 분비 세포 주변에 국소적으로 포획됩니다. 이후 세포를 세척으로 제거하고 biotinylated detection 항체 → streptavidin-AP → BCIP/NBT 기질을 순차로 처리하면, 사이토카인이 분비된 자리마다 청흑색 spot이 멤브레인에 침착됩니다. 한 개의 spot이 한 개의 분비 세포를 의미하므로 분비된 단백질 농도가 아니라 분비 세포 수를 직접 정량할 수 있고, 이 원리 덕분에 sandwich ELISA보다 약 400배 높은 감도(10만 개 중 1개)가 가능합니다.
- •PVDF/MCE 멤브레인 plate + capture 항체 사전 고정
- •분비 직후 항원이 세포 주변에 국소 포획 → 확산·희석 손실 없음
- •Streptavidin-AP + BCIP/NBT로 청흑색 spot 발색
- •Spot 1개 = 분비 세포 1개, 정량 단위는 SFC(spot-forming cell)
Dual ELISpot vs Dual Fluorospot — 2종 사이토카인 동시 검출
두 포맷 모두 한 well에서 2종 cytokine을 동시에 측정하지만 검출 원리가 다릅니다. Dual ELISpot은 서로 다른 효소(예: AP/BCIP-NBT 청색 + HRP/AEC 적색)와 chromogen을 결합해 색상으로 cytokine을 구분하며, 두 색이 겹치는 spot은 double producer로 추정합니다. Dual Fluorospot은 두 개의 형광 표지(서로 다른 excitation/emission)를 사용해 single·double·triple producer를 fluorescence 강도와 채널별로 명확히 분리합니다. Polyfunctional T cell 분석이나 Th1/Th2 동시 평가처럼 정량 정확도가 중요한 실험에는 Fluorospot이, 일반 ELISpot reader 인프라만 있는 환경에는 Dual ELISpot이 적합합니다.
- •Dual ELISpot — 효소 2종(AP+HRP), 색상 중첩으로 double 추정
- •Dual Fluorospot — 형광 2색, 채널별 명확한 single/double 분리
- •Fluorospot은 polyfunctional T cell·triple producer 분석에 최적
- •Dual ELISpot은 일반 ELISpot reader, Fluorospot은 형광 reader 필요
백신 개발·임상시험에서의 reference method
IFN-γ ELISpot은 백신 효능 평가에서 항원 특이 T cell 반응을 정량하는 표준 reference method로 사용됩니다. PBMC를 백신 항원·peptide pool로 자극한 뒤 IFN-γ 분비 세포(SFC)를 PBMC 100만 개당으로 보고하며, CD4+/CD8+ T cell 반응의 강도와 frequency를 객관적으로 비교할 수 있습니다. COVID-19, HIV, malaria, tuberculosis, 그리고 cancer/neoantigen 백신 임상시험에서 secondary 또는 co-primary endpoint로 채택되어 왔습니다. Diaclone은 자사 ELISpot 키트 공급뿐 아니라 임상시험 검체 분석을 위탁받는 custom assay development·contract testing 서비스를 통해 sponsor가 동일한 reagent와 protocol로 다국가·다기관 분석을 수행하도록 지원합니다.
- •백신 임상시험에서 항원 특이 T cell 반응 정량의 표준 방법
- •결과는 SFC / 10⁶ PBMC 단위로 보고 — 다기관 비교 용이
- •COVID-19·HIV·malaria·TB·cancer 백신 endpoint로 채택
- •Custom assay 개발 + clinical trial 검체 위탁 분석 서비스
제품 사양
| 총 제품 수 | 54종 (Kit + Set + Pair + Dual) |
|---|---|
| 검출 감도 | 10만 개 세포 중 1개 검출 (ELISA 대비 400배) |
| 분석 시간 | 세포 자극 후 약 3시간 |
| 검출 방식 | 효소(BCIP/NBT) 또는 형광(Fluorospot) |
| 대상 종 | Human, Murine, Rat |
| 포맷 | Kit(코팅 완료), Set(사용자 코팅), Pair(항체만), Dual Set/Fluorospot |
애플리케이션
백신 개발·임상시험
- •백신 항원·peptide pool 자극 후 IFN-γ ELISpot으로 T cell 반응 정량
- •COVID-19·HIV·malaria·tuberculosis 백신 임상 endpoint
- •Cancer / neoantigen 백신 후보 면역원성 평가
- •다기관·다국가 임상에서 SFC/10⁶ PBMC 단위 데이터 비교
암 면역치료 모니터링
- •CAR-T·TCR-T 치료 후 항원 특이 T cell 빈도 추적
- •Checkpoint inhibitor (PD-1/PD-L1, CTLA-4) 반응 평가
- •Neoantigen·tumor associated antigen 특이 T cell 검출
- •Tumor-infiltrating lymphocyte (TIL)의 cytokine 분비 기능 평가
자가면역·알레르기
- •Th1/Th2 polarization (IFN-γ vs IL-4) Dual Fluorospot 분석
- •Allergen 특이 T cell·IL-4·IL-13 분비 세포 정량
- •Autoreactive T cell (RA, MS, T1D 등) 항원 반응성 측정
- •Treg·Th17 관련 cytokine(IL-10, IL-17) 분비 프로파일
이식 면역
- •공여자 항원 반응성 T cell (donor-reactive T cell) 빈도 측정
- •이식 전 alloreactive T cell precursor frequency 평가
- •이식 후 거부 반응 위험 예측 및 면역억제 모니터링
- •GvHD 위험 평가용 IFN-γ·IL-2 ELISpot
Custom 위탁 서비스
- •신규 cytokine ELISpot/Fluorospot 페어 custom 개발
- •임상시험 endpoint 검체 위탁 분석 (contract testing)
- •Pre-coated plate OEM 위탁 제조 — 동일 lot 다기관 공급
- •Mono / Dual / Fluorospot 포맷 컨설팅 및 프로토콜 최적화
Diaclone ELISpot 포맷 비교 — Mono / Dual ELISpot / Dual Fluorospot
| 사양 | Mono ELISpot | Dual ELISpot | Dual Fluorospot |
|---|---|---|---|
| 동시 검출 cytokine 수 | 1종 | 2종 | 2종 (triple Fluorospot 시 3종) |
| 검출 방식 | 효소 (AP / BCIP·NBT) | 효소 2종 (AP + HRP) | 형광 표지 2종 |
| Spot 색상 | 청흑색 단색 | 청색 + 적색 | 형광 2채널 (Ex/Em 분리) |
| Double producer 식별 | — | 색상 중첩(보라)으로 추정 | ✓ 채널 분리로 명확 |
| 정량 정확도 | 개별 spot 카운팅 | 중첩 spot 보정 필요 | ✓ 형광 강도·채널 기반 정밀 |
| Polyfunctional T cell 분석 | — | 제한적 | ✓ single/double/triple 분리 |
| 필요 reader | 일반 ELISpot reader | 일반 ELISpot reader (컬러) | 형광 ELISpot reader |
| 구성 옵션 | Kit / Set / Pair | Set | Set |
| 분석 시간 (자극 후) | 약 3시간 | 약 3시간 | 약 3시간 |
| 시료당 비용 | 낮음 | 중간 | 높음 |
| 권장 사용자 | 백신·임상 endpoint, 단일 cytokine | Th polarization·자가면역 (형광 reader 부재) | 면역치료 R&D, polyfunctional T cell 정밀 |
